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熒光免疫檢測原理
點擊次數:812 發布時間:2019-01-23
熒光免疫檢測原理
熒光免疫檢測技術具有專一性強、靈敏度高、實用性好等優點,因此它被用於測量含量很低的生物活性化合物,例如蛋白質(酶、接受體、抗體)、激素(甾族化合物、甲狀腺激素、酞激素)、藥物及微生物等。
熒光免疫檢測原理
作為免疫分析法的一種,FIA同樣存在兩種模式,即競爭型和夾心型。其中競爭型(以標記抗原的競爭型為例)的測定原理是基於未標記的抗原(Ag)和標記抗原(Ag-L)競爭結合有限的抗體(Ab)而實現的免疫分析法。檢測時,Ab和Ag-L的濃度是固定的。當未標記的Ag加到Ab和Ag-L的免疫混合物中後,Ag和Ab的結合使得Ag-L與Ab的免疫複合物的量減少。樣品中存在的Ag越多,Ab結合的Ag-L便越少,從Ab-Ag-L免疫複合物的減少或遊離Ag-L的增加,可以定量測定出樣品中待測抗原的含量。其反應過程如下:Ag+Ag-L+Ab≒(Ag:Ab)+(Ag-L:Ab)
對夾心型免疫分析來說,其反應原理是在免疫反應的載體上固定過量的Ab,然後加入一定量的Ag,免疫反應後,再加入過量的標記抗體(Ab-L),以形成“三明治”式夾心免疫複合物。樣品中存在的Ag越多,結合的Ab-L也越多,夾心免疫複合物的標記熒光信號就越強。反應過程如下:Ab+Ag≒Ab:Ag≒Ab:Ag:Ab-L。
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