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玉米赤黴烯酮免疫親和柱的淨化過程以及結果判定詳細描述
點擊次數:67 發布時間:2020-12-16
  玉米赤黴烯酮(Zearaleaone)又稱F-2毒素,是玉米赤黴菌的代謝產物,具有類雌激素樣作用,具有較強的生殖毒性和致畸作用,可引起動物發生雌激素亢進症,導致動物不孕或流產,對家禽、豬、牛和羊的影響較大,給畜牧業帶來很大的經濟損失。
 
  玉米赤黴烯酮免疫親和柱試驗原理:
 
  本產品的測定的基礎是抗原抗體反應,玉米赤黴烯酮單克隆抗體連接在柱內凝膠上,樣品中的玉米赤黴烯酮經過提取、過濾、稀釋,然後將樣品提取液緩慢的通過玉米赤黴烯酮免疫親和層析柱,在免疫親和柱內,玉米赤黴烯酮與抗體結合,之後洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他物質。用甲醇洗脫玉米赤黴烯酮,然後注入到分析儀器中用於檢測。
 
  玉米赤黴烯酮免疫親和柱淨化過程:
 
  1、3mL柱管取出上方堵頭,減去上堵頭螺紋下突出部分,插回柱子上(1mL柱管上方堵頭取出後斜 剪斷,然後再插回柱子上),另一端與20mL針筒固定後使用;
 
  2、準確移取上述混勻濾液,注入針筒中,調節針筒壓力使其以2秒/滴的速度緩慢通過免疫親和柱;
 
  3、用20mL 水衝洗柱子,流速1秒/滴,棄去流出液,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有殘餘 液體;
 
  4、準確加入2mL甲醇(色譜級)洗脫,流速自然重力,直至2~3mL空氣通過柱體,保證柱子內沒有 殘餘液體。收集全部洗脫液;
 
  5、過有機濾膜(孔徑0.22μm)後,進行HPLC測定;或用氮氣吹幹,經流動相複溶,過有機濾膜 (孔徑0.22μm)後,參照GB 5009.209-2016或GB/T 28716-2012條件進行HPLC測定。
 
  結果判定:
 
  經玉米赤黴烯酮免疫親和柱淨化後,收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計或者HPLC檢測,也可使用薄層色譜或者酶聯免疫試劑盒進行檢測。收集到的1ml洗脫液中的玉米赤黴烯酮含量相當於1g樣品中玉米赤黴烯酮含量。
 
  過程中的注意事項:
 
  1. 親和柱使用前,需要提前平衡30min至室溫;
 
  2. 親和柱與20mL針筒連接時,一定旋緊20mL針筒與堵頭連接處,防止上樣過程漏液;
 
  3. 采用大量程移液器準確移取混勻濾液進行上樣;樣液流過柱體的速度不能過快,采用固相萃取架過柱 時可以調節流速為2秒/滴,若無此設備,自然重力流速也可;
 
  4. 衝洗柱子時保持自然重力流速即可;對於醬油、醋、油類、玉米加工副產物及飼料等顏色較深的樣品, 可以先用10mL 0.1%吐溫20-PBS清洗,再用10 mL 10%甲醇-水衝洗,後用10mL水衝洗柱子;
 
  5. 柱子衝洗過後一定要用洗耳球吹幹柱子內殘餘的液體,但不能讓柱子幹燥時間過長,要立即加入洗脫 液;
 
  6. 采用玻璃移液管準確移取2mL色譜級甲醇進行洗脫,自然重力流速即可(不可施壓),後一定要用 洗耳球吹幹柱子內殘餘的甲醇,收集全部洗脫液;
 
  7. 洗脫液必需先經過0.22μm濾膜過濾才能進行HPLC測定;
 
  8. HPLC測定值接近高檢出值時,樣本實際含量可能大於柱容量而造成流穿,需減少上樣體積。
 
  適用範圍及性能:
 
  用於定量檢測穀物、酒類等食品和飼料等樣本中的玉米赤黴烯酮時的樣品前處理。
 
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